一、 对生产用细胞基质总的要求

(四) 细胞检定

3. 分枝杆菌检查

“用于外源病毒因子检查的豚鼠接种法也可检测分枝杆菌，按表2所列方法进行试验和观察。豚鼠在注射前应观察4周，结核菌素试验为阴性者方可用于试验，观察期末应进行结核菌素试验，并剖检观察主要脏器是否有结节形成。结核菌素试验为阴性，主要脏器无结节，则为符合要求。”

4. 支原体检查支原体/螺原体检查

如为昆虫细胞、或细胞培养过程中使用了植物性材料，应进行螺原体检查，所用方法如培养法或核酸法应能检测中间原体属和虫原体属。

5. 细胞内、外源病毒因子检查

(1) 细胞形态观察及血吸附试验实验

(2) 体外不同指示细胞接种培养法检测病毒因子（1）体外培养法检测病毒因子

用待检细胞培养上清液制备活细胞或细胞裂解物，分别接种至少下列三种单层指示细胞，包括猴源细胞、人二倍体细胞和同种属、同组织类型来源的细胞。对于昆虫细胞，还应至少增加两种敏感的指示细跑进行检测，一种为对虫媒病毒易感的蚊子细胞。也可使用BHK-21细胞。另一种为对多种昆虫病毒易感的细胞，如果蝇胚胎来源细胞，细胞裂解物应采用细胞悬液或用培养细胞后的上清重悬细胞样本制备，待测样本检测前，可于-70℃ -60℃或以下保存。

一、 对生产用细胞基质总的要求

(四) 细胞检定

5. 细胞内、外源病毒因子检查

（1）体外培养法检测病毒因子

2020版中国药典

每种单层指示细胞至少接种10⁷个活细胞或相当于10⁷ 个活细胞的裂解物。接种量应占维持液的 1/4 以上，每种指示细胞至少接种2瓶。取培养7天的细胞各1瓶，取上清液或细胞裂解物再分别接种于新鲜制备的相应的指示细胞盲传一代，与初次接种的另一瓶细胞继续培养7天，观察细胞病变，并在观察期末取细胞培养物进行血吸附试验; 取细胞培养上清液进行红细胞凝集试验。

2025版中国药典

每种指示细胞至少按种1X10⁷个活细胞或相当于1X10⁷个活细胞的裂解物。接种细胞后应至少培养28天，期间可至少传代一次，但传代时间距观察期末不得少于7天。可将细胞培养物裂解后再接种于新鲜制备的指示细胞，或直接传代。观察细胞病变，并在观察期末取细胞培养物进行血吸附试脸;取细胞培养上清液进行红细胞凝集试脸，如只能使用悬浮或半悬浮细胞(如昆虫细胞)作为指示细胞时，可仅进行红细胞凝集试验。

（2）动物体内接种法检测外源病毒因子

2020版中国药典

用待检细胞培养上清液制备活细胞 (或适宜时采用相当量的细胞裂解物)，接种动物体内进行外源病毒因子检测。待检细胞至少应接种乳鼠、成年小鼠和鸡胚 (两组不同日龄) 共计4组，如为新建细胞，还需接种豚鼠。原代猴肾细胞还需用家兔体内接种法或兔肾细胞培养法检查猴殖磨B病毒。按表2所列方法进行试验和观察。接种后24小时内动物死亡超过20%，试验无效。

2025版中国药典

根据细胞的传代历史、生产工艺及检测策略进行风险评估，确定是否进行动物休内接种法检测。如进行动物体内接种法检测，应至少接种乳鼠、成年小鼠和鸡胚，如有必要，可增加豚鼠或家免体内接种。用待检细胞培养上清液制备活细胞(或适宜时采用相当量的细胞裂解物)，接种动物体内进行外源病毒因子检测，按表2所列方法进行试验和观察，接种后24小时内动物死亡超过20%。试验无效。

（3）逆转录病毒检测

2020版中国药典

感染性试验：将待检细胞感染逆转录病毒敏感细胞，培养后检测。根据待检细胞的种属来源，须使用不同或多种的敏感细胞进行逆转录病毒感染性试验。

2025版中国药典

感染性试验：将待检细胞感染逆转录病毒敏感细胞，培养后检测，根据待检细胞的种属来源，须使用不同的或多种敏感细胞进行逆转录病毒感染性试验。如Mudunni细胞用于鼠逆转录病毒的检测，SC-1细胞用于亲嗜性逆转录病毒的检侧，人源细胞系用于昆虫逆转录病毒的检测等，终点检测方法可选择PERT试验、SL试验或XC空斑试验等。

2020版中国药典

已知鸡胚成纤维细胞 (CEF) 或其他禽源性细胞含有逆转录病毒序列，常可产生缺陷型逆转录病毒颗粒， 逆转录酶活性为阳性， 对这类细胞进行逆转录病毒检测时，可直接检测细胞基质中是否存在外源性逆转录病毒污染，如禽白血病病毒、 禽网状内皮病肿瘤病毒、感染性内源、性逆转录病毒。 在某些情况下， 也可通过监测鸡群， 以保证无上述感染性逆转录病毒污染。小鼠及其他啃齿类动物来源的细胞系含有逆转录病毒基因序列， 可能会表达内源性逆转录病毒颗粒， 因此，对于这类细胞系， 应进行感染性试验， 以确定所表达的逆转录病毒是否具有感染性。

2025版中国药典

已知产生逆转录病毒的细胞，如啮齿类动物来源的细胞、昆虫细胞及禽源性细胞，可不进行逆转录酶活性检测，但应进行逆转录病毒颗粒的类型、数量及感染性的检查。对于已有丰富先验知识的细胞系。如CHO、NS0、Sp2/0、Vero等，不需要进行化学诱导试验。对于新的细胞基质采用化学诱导试验有助于评估细胞中是否存在未知的可被诱导的内源性逆转录病毒。对潜在的DNA病毒(如人源细胞中的疱疹病毒)和RNA病毒(如昆虫细胞中的诺达病毒)。基于风险评估结果。也可使用化学诱导试验进行检测。

（4）种属特异性外源病毒因子的检测

2020版中国药典

应根据细胞系/株种属来源、组织来源及供体健康状况等确定检测病毒的种类。若在MCB或WCB中未检测到种属特异性病毒，后续过程中不再进行重复检测。

猴源细胞系/株应考虑检测猴多瘤病毒 (如SV40)、

猴免疫缺陷病毒 （SIV) 等。

2025版中国药典

应根据细胞系/株种属来源、组织来源及供体健康状况等确定检测病毒的种类，若在MCB或WCB中未检测到种属特异性病毒，后续过程中如无引人风险，不再进行重复检测。

猴源细胞系/株应考虑检测猴多瘤病毒 (如SV40) 、猴泡沫病毒(SFV)、猴逆转录病毒(SRV)，猴T细胞嗜淋巴病毒(STLV)等免疫缺陷病毒(SIV)。

昆虫细胞系，应考虑检测已报告污染的特定病毒(如诺达病毒)，或可能持续存在于昆虫细胞系中并已知对人类具有传染性的病毒。

（8）分子生物学方法（新增）

分子生物学方法包括核酸扩增(NAT)法和二代侧序(NGS)法。NAT法，如PCR法，可用于特定的病毒检测。NGS法适用于广谱和特定的病毒检测。基于风险评估结果，广谱的NGS法可用于替代体内法，也可用于补充或替代体外法(如缺少病毒易感细胞或样品对检测存在干扰或毒性)

应使用合适的参考物质对NGS法进行方法验证或确认，病毒标准物质应由不间特性的病毒组成，包括不同物理特性（大小，有/无包膜）、不同化学特性(低、中和高抗性)及不同基因组特性(DNA或RNA，双链或单链，线性或环状）、NGS的验证或确认应支持其预期用途、当作为替代方法时，包括方法验征及样本适用性确认。当作为补充方法时，包括方法的确认和样本适用性确认。方法验证参数至少应包括专属性、病毒检测范围及灵敏度，并预先设定可换受标准。

对NGS阳性结果应进一步确认检测到的核酸是否与感染性病毒相关。

一、 对生产用细胞基质总的要求

(四) 细胞检定

6. 成瘤性检查

（4）种属特异性外源病毒因子的检测

2025版中国药典

昆虫细胞或禽源细胞进行体内成瘤性检查时，需评估方法的适用性，如细胞生长温度基否与哺乳动物物种的体温相适应。

8. 稳定性（新增）

细胞稳定性通常包括生产稳定性和贮存稳定性，在生产稳定性上，应评估MCB/WCB与EOPC（或生产限定代次细胞)之间产品的产量和特性的一致性。对于重组细胞，还应评估MCB/WCB与EOPC(或生产限定代次细胞)之间插入基因的序列、插入位点(如适用)、目的蛋白序列及翻译后修饰的一致性。对于二倍体细胞:从MCB/WCB至EOPC(或生产限定代次细胞)还应确保细胞的二倍性。在贮存稳定性上，可通过生产中细胞复苏时的活力数据来评估。若长时间未生产，也可按照一定的时间间隔对贮存细胞的活力进行测定来评估。

一、 对生产用细胞基质总的要求

(五) 生产用细胞培养

2020版中国药典

从冻存的WCB中取出1支或多支安瓿，混合后培养，传至一定代次后供生产用。其代次不得超过该细胞用于生产的最高限定代次。生产用细胞的最高限定代次应根据研究结果确定，但不得超过国际认可的最高限定代次。从WCB取出的细胞经增殖后获得的细胞不得再回冻保存用于生产。

2025版中国药典

从冻存的WCB或MCB中取出一支或多支冻存细胞混合后培养……但不得超过国际认可的最高限定代次。从WCB或MCB取出的细胞经扩增后获得的细胞不得再回冻保存用于生产。

病毒类制品生产对照细胞是指取与生产同一批次的细胞，按一定比例留取细胞样品，不接种目标病毒，与接种目标病毒的细胞采用相同的生产条件，平行培养至规定的时间。如生产中设置对照细胞，在生产末期，应取对照细胞，按本通则“一、(四)1.细胞鉴别试验，2、细菌、真菌检查，4.支原体/螺原体检查”以及外源病毒因子检查法(通则8302)检查。应符合规定。

二、 连续传代细胞系的特殊要求（删除）

“传代细胞系→般是由人或动物肿瘤组织或正常组织传代或转化而来， 可悬浮培养或采用微载体培养，能大规模生产。 这些细胞可无限传代， 但到一定代次后， 成瘤性会增强。 应按本通则 "一、 (四) 细胞检定" 的规定进行细胞库的检查。 对生产过程中细胞培养的要求如下。

1. 用于生产的细胞代次

用于生产的传代细胞系，代次应有一定限制。用于生物制品生产的细胞最高限定代次须经批准。

2. 生产过程中的细胞检查

除另有规定外， 病毒类制品，在生产末期，取不接种病毒的对照细胞，按本通则 "一、 (四) 1. 细胞鉴别试

验，2. 细菌、 真菌无菌检查，4. 支原体检查" 以及病毒外源因子检查法 (通则3302)，应符合规定。”

三、 人二倍体细胞株的特殊要求

1. 染色体检查及判定标准

2020版中国药典

（1）染色体检查

每次染色体检查，应至少随机取1000个分裂中期细胞，进行染色体数目、形态和结构检查，并做记录， 以备复查。其中至少选择50个分裂中期细胞进行显微照相，作出核型分析，并应粗数500个分裂中期细胞， 检查多倍体的发生率。

（2）判定标准

对1000个和500个分裂中期细胞标本异常率进行检

查，合格的上限 (可信限90%Poison法) 

2025版中国药典

（1）染色体检查

应至少随机取 200个分裂中期细胞，精细计数染色体数目，进行超二倍体、亚二倍体和多倍体检查以及染色单体、染色体断裂(包括缺失、插入，倒位、易位)、双着丝粒、多着丝粒、环状染色体、染色体交换等结构异常检查。随机选取至少50个分裂中期细胞，进行G分带成Q分带核型分析，并精细检查染色体缺失、插入、倒位、易位等结构异常，并记录。精细计数中如发现除亚二倍体以外的染色体异常分裂中期细胞，也应进行核型分析做精细检查。

（2）判定标准

对200个及以上中期细胞标本异常率进行检查，合格的上限(可信限90%Poison法)

四、 重组细胞的特殊要求（删除）

重组细胞系通过DNA重组技术获得的含有特定基因序列的细胞系， 因此重组细胞系的建立应具有细胞基质构建方法的相关资料， 如细胞融合、 转染、 筛选、 集落分离、克隆、 基因扩增及培养条件或培养液的适应性等方面的资料。 细胞库细胞的检查除应按本通则 “一、 〈三) 细胞检定" 的规定进行， 还应进行下述检查。

1. 细胞基质的稳定性

生产者须具有该细胞用于生产的目的基因的稳定性资料， 稳定性检测的项目及方法依据产品的特性确定，对于细胞基质来说， 稳定性的分析是保证MCB/WCB与EOPC之间的一致性， 包括重组细胞的遗传稳定性 (如插入基因拷贝数、 插入染色体的位点、插入基因的序列等)、 目的基因表达稳定性、 目的产品持续生产的稳定性，以及一定条件下保存时细胞生产目的产品能力的稳定性等资料。

2. 细胞鉴别试验

除按本通则 “一、 (四) 1. 细胞鉴别试验" 进行外，还应通过检测目的蛋白基因或目的蛋白进行鉴别试验。

五、 原代细胞的要求

新增检查项：

(2)细菌、真菌检查

依法检查(通则1101)，应符合规定。

(3)支原体检查

依法检查(通则3301)，应符合规定

六、 检定用细胞的要求（删除）

(一) 细胞资料

(二) 细胞检定

• 0235 生物制品检定用动物细胞质量控制

“通则0235生物制品检定用动物细胞基质的要求”是在上版药典内容基础上增加了特定基因修饰检定细胞的内容，包括对其构建过程，特征鉴别，使用代次及稳定性等方面提出具体要求，以满足产业发展的需求。

本通则适用于人用生物制品检定用动物细胞。检定用细胞是指用于生物制品检定的细胞，包括原代细胞、连续传代细胞或二倍体细胞，以及经特定基因些饰过的细胞。检定用细胞的质量对检定结果的判定具有重要的影响、为保证检定结果的有效性、可靠性及真实性，检定用细胞应符合下列要求。

一、细胞资料

1.检定用细胞应具有明确来源的证明资料，特定基因修饰的细胞、应详细记录构建及建库过程。

2.如使用传代细胞系/株，应建立细胞库体系，即主细胞库和工作细胞库，如细胞使用是较少，可建立单一主细胞库。应根据制品特性，在保证检测结果可靠性的基础上，通过验证确定该细胞允许使用的细胞限定代次，在此基础上规定检定用细胞的使用代次范围，检定时从工作细胞库复苏细胞后，不能再回冻保存。

3.应详细记录检定用细胞建库的过程，包括细胞培养所用原材料的来源、批号，细胞生长液的配制方法、使用浓度等，以及细胞的传代及冻存过程，并建立细胞冻存及使用台账，

二、细胞检定

应至少进行第1~3项检定，根据检定用细胞用途不同，还应进行以下共他相关项目的检定，

1.细胞鉴别实验

按生物例品生产用动物细胞基质制备及质量控制(通则0234)中“、(四)1，细胞鉴别试脸”进行。或他适宜的方法，以确认细胞正确，并且无其他细胞的交叉污染。对于基因移饰的细胞。应采用适宜的方法对基因修饰特征进行鉴别。

2，细菌、真菌检查依法检查(通则1101)，应符合要求

3，支原体检测依法检查(通则3301)，应符合要求

4.外源病毒因子检查采用通则0234中“一”、(四)体外培养法检制病毒因子”项检查，应无外源病毒污染。

……

• 0237 国家生物标准物质研制

2025版药典“通则0237国家生物标准物质研制”的修订重点系对国家生物标准物质的定义、研制和管理进行规范解读，增加了标准物质的互换性和基线样品的定义。在标准物质制备中增加了生物安全性的考量，标定方案聚焦量值传递的连续性，强调依据标准物质的特性进行监测，这些规范措施有力地推动了标准物质全生命周期研究的深入开展以及生物制品标准物质的升级换代。